豬腦心肌炎病毒VP2蛋白單克隆抗體的制備及其識別表位分析

為獲得針對豬源EMCV結構蛋白VP2的特異性單克隆抗體,本試驗以EMCV結構蛋白VP2為對象,將EMCV BJC3株VP2基因定向插入穿梭質粒中,構建重組腺病毒AdV-VP2,免疫BALB/c小鼠制備單克隆抗體,利用Pepscan技術對單抗識別的抗原位點進行分析.結果顯示,間接ELISA及間接免疫熒光法篩選獲得了2個陽性細胞克隆株,命名為C11和G8.經檢測雜交瘤細胞培養(yǎng)上清抗體效價為1:1 600,腹水效價分別為1:2.56×106和1:1.28×106,中和試驗鑒定均無中和活性.Western-blot鑒定表明獲得的2株單抗均能識別原核表達的重組VP2蛋白.亞類鑒定結果顯示2株單抗均為IgG2b亞類,輕鏈均為κ型.Pepscan分析結果顯示,這2株單抗可分別識別EMCV VP2蛋白上的2個B細胞線性表位.本研究獲得的蛋白十分接近于其天然構象,很大程度上保證了病毒表面抗原位點的結構和功能.

作 者： 魏瑩 蓋新娜 賈紅 郭鑫 楊漢春 WEI Ying GE Xin-na JIA Hong GUO Xin YANG Han-chun   作者單位： 中國農業(yè)大學農業(yè)部人畜共患病重點開放實驗室,北京,100094  刊 名： 中國動物傳染病學報  英文刊名： CHINESE JOURNAL OF VETERINARY PARASITOLOGY  年，卷(期)： 2009 17(1)  分類號： S852.65  關鍵詞： 腦心肌炎病毒   VP2蛋白   單克隆抗體   表位識別  

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