快速微量提取番茄DNA及SSR-PCR反應體系的優(yōu)化

以番茄葉片為試材,采用改進的CTAB法,電鉆研磨,提取過程中加入醋酸銅,設計4因素3水平的正交試驗對PCR反應體系進行優(yōu)化,同時利用梯度PCR對退火溫度進行選擇選擇.結果表明:優(yōu)化的10μL反應體系含:1 × buffer,1.2 mmol/L Mg2+,1.5 mmol/L dNTPs,1.2 μmol/L引物,0.75 U Taq DNA聚合酶,10 ng模板DNA.擴增程序為:94℃預變性2 min;94℃變性30 s,49.2℃退火30 s,68℃延伸30 s,共35個循環(huán);最后72℃延伸8 min.優(yōu)化的反應體系可以用于SSR分子標記機的研究,在所有SSR引物中基本都能有效擴增;改進的CTAB法提取的DNA純度更高.

作 者： 賈俊忠 田麗萍 位江靜 張超 魏亦農 吳曉剛 薛林   作者單位： 賈俊忠,位江靜,張超,魏亦農,吳曉剛(石河子大學,生命科學學院,新疆,石河子,832000)

田麗萍(石河子大學,藥學院,新疆,石河子,832000)

薛林(新疆石河子蔬菜研究所) 

刊 名： 北方園藝  PKU 英文刊名： NORTHERN HORTICULTURE  年，卷(期)： 2010 ""(8)  分類號： S641.203.6  關鍵詞： 番茄   DNA微量提取   PCR反應體系優(yōu)化   分子標記  

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