糞便中腸球菌SYBR GreenI熒光定量PCR檢測方法的建立

目的 利用SYBR GreenI熒光定量PCR方法,建立腸球菌實時熒光PCR檢測方法,并初步應用于糞便中腸球菌的檢測.方法 根據GenBank發表的腸球菌23S rRNA基因序列的保守區域設計合成特異性的引物;利用構建的質粒標準品繪制兩種標準曲線,構建基因拷貝數、細菌數為分析指標的定量分析模型并初步應用于糞便標本的檢測分析.結果 所建立的SYBR GreenI熒光定量PCR方法檢測靈敏度可達7個拷貝數/reaction.糞便樣本根據實時熒光定量PCR方法所得的理論數值與培養菌值之間差異無顯著性(P＞0.05).非炎性腹瀉標本中菌數與健康成人標本中菌數差異無顯著性(P＞0.05).靈敏度曲線所得的數值大于菌數標準曲線,可能由于DNA提取過程中存在部分的損失.檢測糞便標本結果顯示SYBR GreenI熒光定量PCR方法較平板計數法敏感、快捷、簡便.結論 本研究建立了一種靈敏、特異、簡便易行的腸球菌定量檢測方法.

作 者： 任月 袁杰利 盧行安 曹滌菲 蔡竹 REN Yue YUAN Jie-li LU Xing-an CAO Di-fei CAI Zu   作者單位： 任月,REN Yue(大連醫科大學,遼寧,大連,116027)

袁杰利,YUAN Jie-li(大連醫科大學,微生態學教研室,遼寧,大連,116027)

盧行安,LU Xing-an(遼寧出入境檢驗檢疫局,遼寧,大連,116001)

曹滌菲,CAO Di-fei(黑龍江八一農墾大學,黑龍江,大慶,163319)

蔡竹,CAI Zu(大連醫科大學,組織人事部,遼寧,大連,116027) 

刊 名： 中國微生態學雜志  ISTIC 英文刊名： CHINESE JOURNAL OF MICROECOLOGY  年，卷(期)： 2007 19(6)  分類號： Q378.992  關鍵詞： 腸球菌   熒光定量PCR   糞便  

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