人朊蛋白基因的克隆與原核表達

以人血液中提取的總DNA為模板,克隆朊蛋白(prion protein, PrP)基因Prnp的開放閱讀框(ORF),與pMD-18T載體連接后轉(zhuǎn)入E.coli JM109,用Blast軟件比較重組質(zhì)粒序列,結(jié)果表明獲得的人Prnp的ORF與Genbank登錄的相應(yīng)核苷酸序列最高同源性為99.6 %,推導(dǎo)的氨基酸序列同源性為99.8 %.將編碼人成熟PrP的基因定向克隆到pET-30a(+)表達載體,將重組質(zhì)粒pET-homPrP轉(zhuǎn)化E.coli BL21(DE3),在37 ℃下用1.0 mmol/L IPTG誘導(dǎo),重組融合蛋白獲得高效表達,SDS-PAGE顯示表達產(chǎn)物以包涵體形式存在,占菌體總蛋白的20 %～25 %.用Ni-NTA樹脂親和層析純化了表達產(chǎn)物.Western-blotting分析表明,融合蛋白被抗PrP的單克隆抗體特異識別.因此,在大腸桿菌中表達的人成熟PrP融合蛋白可以作為制備PrP抗體的免疫原.

作 者： 姜海霞 劉永生 楊孝樸 陳豪泰 朱小玲 張杰 謝慶閣 JIANG Hai-xia LIU Yong-sheng YANG Xiao-pu CHEN Hao-tai ZHU Xiao-ling ZHANG Jie XIE Qing-ge   作者單位： 姜海霞,朱小玲,JIANG Hai-xia,ZHU Xiao-ling(甘肅農(nóng)業(yè)大學(xué)動物醫(yī)學(xué)院,甘肅,蘭州,730070;中國農(nóng)業(yè)科學(xué)院蘭州獸醫(yī)研究所家畜疫病病原生物學(xué)國家重點實驗室,農(nóng)業(yè)部畜禽病毒學(xué)重點開放實驗室,甘肅,蘭州,730046)

劉永生,陳豪泰,張杰,謝慶閣,LIU Yong-sheng,CHEN Hao-tai,ZHANG Jie,XIE Qing-ge(中國農(nóng)業(yè)科學(xué)院蘭州獸醫(yī)研究所家畜疫病病原生物學(xué)國家重點實驗室,農(nóng)業(yè)部畜禽病毒學(xué)重點開放實驗室,甘肅,蘭州,730046)

楊孝樸,YANG Xiao-pu(甘肅農(nóng)業(yè)大學(xué)動物醫(yī)學(xué)院,甘肅,蘭州,730070) 

刊 名： 甘肅農(nóng)業(yè)大學(xué)學(xué)報  ISTIC PKU 英文刊名： JOURNAL OF GANSU AGRICULTURAL UNIVERSITY  年，卷(期)： 2006 41(3)  分類號： Q785 Q786  關(guān)鍵詞： 人   朊蛋白基因   克隆   原核表達  

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