應(yīng)用載體介導(dǎo)的RNAi技術(shù)抑制胰腺癌細(xì)胞K-RASAsn12的表達(dá)

為了研究載體介導(dǎo)的RNAi(RNA interference)技術(shù)特異地抑制K-RASAsn12(K-RAS第12位密碼子突變形式為GAT)在胰腺癌細(xì)胞中的表達(dá),合成兩條編碼針對(duì)K-RASAsn12突變特異性短發(fā)夾RNA(short hairpin RNA,shRNA)序列的單鏈DNA,并將其克隆到pSilenCircle載體中,構(gòu)建含目的基因片段的重組質(zhì)粒pSC-K-RASAsn12.同法構(gòu)建含GFP基因片斷的重組質(zhì)粒pSC-GFP做為對(duì)照.用其分別瞬時(shí)轉(zhuǎn)染人胰腺癌AsPC-1細(xì)胞和BxPC-3細(xì)胞后,經(jīng)半定量RT-PCR和Western blot檢測(cè)K-RAS的表達(dá)水平.結(jié)果表明構(gòu)建的針對(duì)K-RASAsn12的編碼突變特異性shRNA的質(zhì)粒表達(dá)載體可特異的抑制胰腺癌細(xì)胞的K-RASAsn12表達(dá),但對(duì)野生型的K-RAS(K-RASWT)表達(dá)無(wú)影響.

作 者： 孟繁杰 付澤嫻 張峰 李保東 謝紹建 蔡建輝 MENG Fan-jie FU Ze-xian ZHANG Feng LI Bao-dong XIE Shao-jian CAI Jian-hui   作者單位： 河北醫(yī)科大學(xué)第二醫(yī)院外科外科研究中心,石家莊,050000  刊 名： 中國(guó)生物工程雜志  ISTIC PKU 英文刊名： CHINA BIOTECHNOLOGY  年，卷(期)： 2006 26(4)  分類(lèi)號(hào)： Q752  關(guān)鍵詞： 胰腺癌K-RAS   RNAi   短發(fā)夾RNA  

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