神經突起因子酵母雙雜交誘餌質粒構建和轉化

目的構建和轉化神經突起因子(Neuritin)的酵母誘餌重組質粒,為通過酵母雙雜交研究Neuritin的功能及作用機制奠定基礎.方法用PCR擴增neuritin全長cDNA中編碼開放讀框的基因片段;將該基因片段與pLex-A載體定向重組;用酶切和測序鑒定重組質粒;將核苷酸序列正確的重組質粒轉化入EGY48[p8op-LacZ]酵母菌株.結果成功構建pLexA-neuritin重組質粒.轉化有重組質粒和pLexA空載體的2種EGY48[p8op-LacZ]酵母都能在SD/Gal/Raf/-His/-Ura培養基中長成白色菌落,同時,轉化pLexA-pos陽性對照質粒的酵母菌在相同條件下長成藍色菌落,但都不能在SD/-His/-Leu/-Ura培養基中生長,在SD/-His/-Ura液中培養16 h后,A600均值均為0.9.表明重質粒表達的融合蛋白沒有激活LEU2和lacZ酵母報告基因表達的活性,也沒有酵母毒性作用.結論構建的誘餌重組質粒可以用于下一階段的人胎腦cDNA文庫篩選.

作 者： 羅星 張峪涵 于娜 孔雪 徐堅 顧少華 楊磊 黃瑾   作者單位： 羅星(新疆石河子大學醫學院生物化學教研室/新疆地方病與民族高發病教育部重點實驗室,石河子,832002;復旦大學生命科學院遺傳學研究所)

張峪涵,于娜,孔雪,楊磊,黃瑾(新疆石河子大學醫學院生物化學教研室/新疆地方病與民族高發病教育部重點實驗室,石河子,832002)

徐堅,顧少華(復旦大學生命科學院遺傳學研究所) 

刊 名： 中國公共衛生  ISTIC PKU 英文刊名： CHINESE JOURNAL OF PUBLIC HEALTH  年，卷(期)： 2006 22(4)  分類號： Q753.71  關鍵詞： 神經突起因子   酵母雙雜交   誘餌質粒  

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