豬β干擾素在畢赤酵母中的分泌表達及其對偽狂犬病毒的抑制作用

為了研制高活性的重組豬β干擾素,對PoIFN-β成熟蛋白第3、7和164位的3個氨基酸密碼子進行畢赤酵母偏嗜性改造并構建了酵母表達載體pPICZαA-PIB.pPICZαA-PIB經SacⅠ酶切線性化后電轉化導入畢赤酵母菌株X-33.多株PCR鑒定為陽性的酵母轉化子經甲醇誘導發酵分泌表達了PoIFN-β, 其中B1株酵母的PoIFN-β產量最高,約為2.5×105U/mL,其表達量約為60μg/mL,比活為4.17×106U/mg.將發酵上清液用PEG20000濃縮后進行SDS-PAGE和Western blot檢測,結果表明表達產物是分子量約為28kDa和25kDa蛋白的混合物,兩者均可與PoIFN-β陽性抗血清發生特異反應.表達產物比PoIFN-β理論推導分子量(約20.8kDa)大,推測可能是表達產物發生了不同程度的糖基化.重組PoIFN-β對偽狂犬病毒在細胞中增殖可呈現抑制作用,并且rPoIFN-β對偽狂犬病毒在MDBK細胞上早期增殖的抑制效果最為明顯.

作 者： 曹瑞兵 周國棟 周海霞 包晶晶 陳溥言 CAO Rui-bing ZHOU Guo-dong ZHOU Hai-xia BAO Jing-jing CHEN Pu-yan   作者單位： 南京農業大學,農業部動物疫病診斷與免疫重點開放實驗室,南京,210095  刊 名： 微生物學報  ISTIC PKU 英文刊名： ACTA MICROBIOLOGICA SINICA  年，卷(期)： 2006 46(3)  分類號： Q78  關鍵詞： 豬β干擾素   畢赤酵母   分泌表達   偽狂犬病毒   抗病毒  

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