抗菌抗癌肽CM4N在大腸桿菌中的融合表達與活性鑒定

為探討內含肽intein在抗菌肽表達與純化中的應用,采用遞歸PCR法合成CM4末端添加Asn的基因CM4N,克隆至E.coli表達載體pTYB11中,構建了與intein的C端融合的表達載體pTYYB11-CM4N.重組質粒轉化至E.coli BL21(DE3)中進行IPTG誘導表達,融合蛋白intein-CM4N主要以可溶形式存在于胞內.利用載體中intein中的chitin結合域,將融合蛋白通過chitin親和層析一步純化,經DTT誘導intein的自我切割活性,實現CM4N在親和柱上的切割與分離,透析凍干后得到了純度95%以上的重組CM4N.活性檢測結果顯示,重組CM4N具有抗大腸桿菌、沙門氏菌和K562腫瘤細胞的活性.研究認為,內含肽在抗菌肽的基因工程中可能具有重要的應用前景.

作 者： 陳玉清 秋雯 焦波 張杰 張雙全 CHEN Yu-qing QIU Wen JIAO Bo ZHANG Jie ZHANG Shuang-quan   作者單位： 南京師范大學生命科學學院,江蘇省分子醫學生物技術重點實驗室,江蘇南京210046  刊 名： 藥物生物技術  ISTIC 英文刊名： PHARMACEUTICAL BIOTECHNOLOGY  年，卷(期)： 2008 15(3)  分類號： Q516  關鍵詞： 抗菌肽CM4   原核表達   intein融合   活性  

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