米曲霉堿性蛋白酶基因的前導區對其在畢赤酵母中表達的必要性

為探討前導區對米曲霉堿性蛋白酶基因在畢赤酵母中表達的必要性,本試驗首先將米曲霉堿性蛋白酶的成熟肽編碼基因(alp-m)和表達載體pPIC9K雙酶切后連接,得到重組表達載體pPIC9K/alp-m.然后將其線性化后電轉化畢赤酵母GS115.篩選陽性轉化子進行甲醇誘導表達,并進行SDS-PAGE分析和堿性蛋白酶活力測定,同時在轉錄水平上對目的基因進行了Northern blot檢測.將得到的結果與以前研究中得到的帶有前導區的米曲霉堿性蛋白酶成熟肽基因在畢赤酵母中的表達結果進行對比.結果表明:如果沒有前導區,米曲霉堿性蛋白酶成熟肽基因在畢赤酵母中表達,無論在胞內和胞外均檢測不到目的蛋白.由此可見,米曲霉堿性蛋白酶基因在畢赤酵母中表達時必須有前導區的參與.

作 者： 郭繼平 馬光 馬鶯 GUO Ji-ping MA Guang MA Ying   作者單位： 郭繼平,馬鶯,GUO Ji-ping,MA Ying(哈爾濱工業大學,食品科學與工程學院,哈爾濱,150086)

馬光,MA Guang(東北林業大學,生命科學學院,哈爾濱,150040) 

刊 名： 上海交通大學學報（農業科學版）  ISTIC 英文刊名： JOURNAL OF SHANGHAI JIAOTONG UNIVERSITY(AGRICULTURAL SCIENCE)  年，卷(期)： 2008 26(3)  分類號： Q786  關鍵詞： 米曲霉堿性蛋白酶基因   前導區   畢赤酵母   異源表達  

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