米曲霉堿性蛋白酶基因的前導(dǎo)區(qū)對(duì)其在畢赤酵母中表達(dá)的必要性

為探討前導(dǎo)區(qū)對(duì)米曲霉堿性蛋白酶基因在畢赤酵母中表達(dá)的必要性,本試驗(yàn)首先將米曲霉堿性蛋白酶的成熟肽編碼基因(alp-m)和表達(dá)載體pPIC9K雙酶切后連接,得到重組表達(dá)載體pPIC9K/alp-m.然后將其線性化后電轉(zhuǎn)化畢赤酵母GS115.篩選陽(yáng)性轉(zhuǎn)化子進(jìn)行甲醇誘導(dǎo)表達(dá),并進(jìn)行SDS-PAGE分析和堿性蛋白酶活力測(cè)定,同時(shí)在轉(zhuǎn)錄水平上對(duì)目的基因進(jìn)行了Northern blot檢測(cè).將得到的結(jié)果與以前研究中得到的帶有前導(dǎo)區(qū)的米曲霉堿性蛋白酶成熟肽基因在畢赤酵母中的表達(dá)結(jié)果進(jìn)行對(duì)比.結(jié)果表明:如果沒(méi)有前導(dǎo)區(qū),米曲霉堿性蛋白酶成熟肽基因在畢赤酵母中表達(dá),無(wú)論在胞內(nèi)和胞外均檢測(cè)不到目的蛋白.由此可見(jiàn),米曲霉堿性蛋白酶基因在畢赤酵母中表達(dá)時(shí)必須有前導(dǎo)區(qū)的參與.

作 者： 郭繼平 馬光 馬鶯 GUO Ji-ping MA Guang MA Ying   作者單位： 郭繼平,馬鶯,GUO Ji-ping,MA Ying(哈爾濱工業(yè)大學(xué),食品科學(xué)與工程學(xué)院,哈爾濱,150086)

馬光,MA Guang(東北林業(yè)大學(xué),生命科學(xué)學(xué)院,哈爾濱,150040) 

刊 名： 上海交通大學(xué)學(xué)報(bào)（農(nóng)業(yè)科學(xué)版）  ISTIC 英文刊名： JOURNAL OF SHANGHAI JIAOTONG UNIVERSITY(AGRICULTURAL SCIENCE)  年，卷(期)： 2008 26(3)  分類號(hào)： Q786  關(guān)鍵詞： 米曲霉堿性蛋白酶基因   前導(dǎo)區(qū)   畢赤酵母   異源表達(dá)  

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