重組幽門螺桿菌AhpC基因的克隆表達及其初步純化

目的克隆表達幽門螺桿菌(helicobacter pylori)AhpC基因,為篩選預防或治療幽門螺桿菌的疫苗保護性抗原奠定基礎.方法用PCR方法從臨床分離株9806的染色體DNA中擴增出AhpC基因片段,將目的基因插入表達載體pET-11c中,重組載體pET-AhpC經DNA測序鑒定后,將重組質粒轉化大腸桿菌E.coli BL21(DE3),IPTG誘導表達.采用陰離子交換層析純化蛋白,并用SDS-PAGE和Western blot鑒定.結果 PCR擴增的AhpC基因長度為597bp,經酶切和測序分析,插入到載體的基因片段與GenBank公布的序列相似性達98%,SDS-PAGE顯示,經IPTG誘導目的蛋白占總蛋白的28.7%,經純化后,蛋白純度達70%以上.Western blot檢測該蛋白與兔抗Hp的多克隆抗血清發生結合反應.結論成功構建了AhpC表達載體pET-AhpC,并在大腸桿菌中高效表達.

作 者： 張衛軍 鄒全明 毛旭虎 羅萍 解慶華   作者單位： 第三軍醫大學臨床微生物學及免疫學教研室暨重慶市生物制藥工程技術研究中心,重慶,400038  刊 名： 重慶醫學  ISTIC PKU 英文刊名： CHONGQING MEDICINE  年，卷(期)： 2006 35(11)  分類號： Q78  關鍵詞： 幽門螺桿菌   AhpC基因   克隆  

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