牛分支桿菌MPT83基因的表達(dá)及重組蛋白的純化

從牛分支桿菌培養(yǎng)物中抽提總DNA,擴(kuò)增了MPT83基因,并克隆入pMD 18-T SimpleVector,將測(cè)序正確的目的基因插入表達(dá)載體pET-32a(+)中,轉(zhuǎn)化BL21(DE3)宿主菌,IPTG誘導(dǎo)表達(dá),用親和層析方法對(duì)表達(dá)蛋白進(jìn)行了純化.經(jīng)測(cè)序,構(gòu)建的克隆質(zhì)粒pMD-MPT83與GenBank中的序列一致;構(gòu)建的表達(dá)質(zhì)粒pET-MPT83經(jīng)PCR和BamH Ⅰ+HindⅢ雙酶切鑒定構(gòu)建正確;經(jīng)SDS-PAGE分析,在約42 ku處出現(xiàn)新的蛋白條帶,4 h后表達(dá)量即達(dá)到高峰;Westernblotting分析表明,融合蛋白能夠被牛分支桿菌陽(yáng)性血清所識(shí)別;純化的表達(dá)蛋白經(jīng)SDS-PAGE電泳,出現(xiàn)清晰的單一條帶.表明MPT83基因原核表達(dá)載體構(gòu)建成功.

作 者： 魯俊鵬 羅滿(mǎn)林 宋延華 鄒濰力 LU Jun-peng LUO Man-lin SONG Yan-hua ZOU Wei-li   作者單位： 魯俊鵬,羅滿(mǎn)林,鄒濰力,LU Jun-peng,LUO Man-lin,ZOU Wei-li(華南農(nóng)業(yè)大學(xué),獸醫(yī)學(xué)院,廣東,廣州,510642)

宋延華,SONG Yan-hua(廣東溫氏食品集團(tuán)有限公司,廣東,新興,527439) 

刊 名： 中國(guó)獸醫(yī)科學(xué)  ISTIC PKU 英文刊名： VETERINARY SCIENCE IN CHINA  年，卷(期)： 2006 36(5)  分類(lèi)號(hào)： S852.618 Q786  關(guān)鍵詞： 牛分支桿菌   MPT83基因   克隆   原核表達(dá)   蛋白純化  

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