帕金森病相關(guān)蛋白α-共核蛋白的可溶性表達(dá)、純化及抗體制備

目的利用分子克隆技術(shù)在原核細(xì)胞中表達(dá)α-共核蛋白(SNCP),并制備兔多克隆抗體.方法從人神經(jīng)母細(xì)胞瘤SH-SY5Y細(xì)胞中提取總RNA,逆轉(zhuǎn)錄成cDNA.利用PCR技術(shù)擴(kuò)增獲得SNCP的cDNA序列,測序正確后克隆至pQE-30-GST表達(dá)載體上,在大腸埃希菌中表達(dá)GST-SNCP融合蛋白.融合蛋白純化后免疫新西蘭大白兔,制備特異性抗血清,并對(duì)該抗體進(jìn)行檢測.結(jié)果瓊脂糖凝膠電泳顯示獲得的SNCPcD-NA序列為420bp.SDS-PAGE和Western blot分析,表達(dá)的融合蛋白呈可溶性,相對(duì)分子質(zhì)量約為45000.以其為抗原制備的SNCP抗血清的ELISA效價(jià)達(dá)到1:32000,并且該抗體可與BALB/c小鼠腦組織中內(nèi)源性SNCP發(fā)生特異性反應(yīng).結(jié)論人SNCP可在原核細(xì)胞中可溶性表達(dá).用表達(dá)的蛋白制備獲得特異性較好的SNCP抗血清,為進(jìn)一步了解SCNP的結(jié)構(gòu)和功能以及在中樞神經(jīng)系統(tǒng)退行性疾病的作用提供了必要的實(shí)驗(yàn)基礎(chǔ).

作 者： 黃銀霞 韓俊 張曉光 姚海蘭 王小凡 張瑾 張寶云 董小平   作者單位： 中國疾病預(yù)防控制中心,病毒病預(yù)防控制所,傳染病預(yù)防控制國家重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室,北京,100052  刊 名： 中國老年學(xué)雜志  ISTIC PKU 英文刊名： CHINESE JOURNAL OF GERONTOLOGY  年，卷(期)： 2006 26(2)  分類號(hào)： Q42 Q786  關(guān)鍵詞： α-共核蛋白   神經(jīng)退行性變   原核表達(dá)   抗體制備  

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