洋蔥伯克霍爾德氏菌L68鄰苯二酚2,3-雙加氧酶基因克隆、表達(dá)和純化

采用自行設(shè)計(jì)的引物,從洋蔥伯克霍爾德氏菌L68中PCR擴(kuò)增得到phnE(鄰苯二酚2,3-雙加氧酶)基因,亞克隆到高表達(dá)載體pET 32a上,轉(zhuǎn)入表達(dá)菌株中.經(jīng)雙向測序,證實(shí)構(gòu)建過程中未出現(xiàn)突變.重組子經(jīng)IPTG誘導(dǎo)后,可以表達(dá)有活性的重組雙加氧酶.選擇26 ℃進(jìn)行重組蛋白誘導(dǎo).薄層掃描顯示,表達(dá)重組蛋白總量最高可占總蛋白的64.92%.利用金屬螯合層析對重組蛋白進(jìn)行了一步純化,SDS-PAGE結(jié)果顯示,重組蛋白純度達(dá)到95%.

作 者： 呂鵬 劉大桅 張長鎧 LUI Peng LIU Dawei ZHANG Chang-kai   作者單位： 山東大學(xué),微生物技術(shù)國家重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室,山東,濟(jì)南,250100  刊 名： 食品與生物技術(shù)學(xué)報(bào)  ISTIC PKU 英文刊名： JOURNAL OF FOOD SCIENCE AND BIOTECHNOLOGY  年，卷(期)： 2006 25(3)  分類號： Q93  關(guān)鍵詞： 洋蔥伯克霍爾德氏菌   鄰苯二酚2,3-雙加氧酶   克隆表達(dá)   金屬螯合層析  

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