Taqman熒光定量PCR是核酸水平對管家基因GAPDH進行定量的好方法

目的比較Taqman熒光定量PCR法、SYBR Green I熒光定量PCR法和普通PCR法制作3-磷酸甘油醛(GAPDH)標準曲線的檢出下限、線性范圍的差異,確定一種較好的GAPDH絕對定量方法.方法構建含GAPDH全長的質粒,經PCR和EcoR I限制性酶切鑒定確認后,紫外定量并連續稀釋10倍作為標準品.分別用Taqman法和SYBR Green I法于熒光定量PCR儀上制作標準曲線,同時用普通PCR結合瓊脂糖凝膠電泳利用Quantity One軟件定量并制作標準曲線.結果Taqman法檢出GAPDH的下限為2.0×104拷貝,線性范圍:2.0×104～2.0×1010拷貝;SYBR Green I法檢出GAPDH的下限為2.0×107拷貝,線性范圍:2.0×107～2.0×1010拷貝;普通PCR檢出GAPDH的下限為2.0×106拷貝,線性范圍:2.0×107～2.0×109拷貝.結論Taqman熒光定量PCR法比SYBR Green Ⅰ熒光定量PCR法和普通PCR法的靈敏度高,線性范圍寬,是核酸水平對GAPDH定量的好方法.

作 者： 王萍 叢敏 李憶梅 唐淑珍 劉曉明 王寶恩 賈繼東 尤紅 Wang Ping Cong Min Li Yimei Tang Shuzhen Liu Xiaoming Wang Baoen Jia Jidong You Hong   作者單位： 首都醫科大學附屬北京友誼醫院肝病研究中心  刊 名： 首都醫科大學學報  ISTIC PKU 英文刊名： JOURNAL OF CAPITAL UNIVERSITY OF MEDICAL SCIENCES  年，卷(期)： 2006 27(2)  分類號： Q503  關鍵詞： PCR   GAPDH   熒光定量  

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