改進Tripure法提取鑒定小鼠組織總RNA

目的改進從新鮮動物組織提取、鑒定純度及完整性較高總RNA的技術方法.方法實驗于2005-05-16/08-25在解放軍第三軍醫大學大坪醫院創傷分子生物學實驗室進行.用健康4～6周齡昆明種小鼠70只,頸椎脫臼法處死,取肺組織約100 mg.在Tripure Isolation試劑說明書基礎上,對提取組織RNA的操作步驟進行調整改進,包括:①迅速組織取材,可不將組織切割成碎塊而直接中速勻漿.②勻漿頭夾層每次使用前后一定要徹底清洗干凈;新鮮組織使用5 mL離心管勻漿.③吸取含RNA的三相分層上清液時,吸取250μL即可.④RNA沉淀后,用無水乙醇再洗1次.并對常規瓊脂糖凝膠電泳做適當改進用于鑒定RNA的質量,改進的電泳方法:①電泳RNA所用器械均用肥皂水、體積分數為0.03的H2O2清洗2遍,1g/L焦碳酸二乙酯處理的滅菌雙蒸水沖洗,室溫晾干備用.②用新配的0.5×TBE配制10g/L瓊脂糖凝膠,倒膠時Goldview核酸染料直接加入凝膠中.③瓊脂糖凝膠板放入電泳槽后再加入經滅菌的0.5×TBE.電泳電壓5 V/cm,電泳時間1.5 h后凝膠成像系統拍照記錄.結果①取提取的總RNA 5 μg進行電泳1.5 h后,可見28S,18S,5S 3條清晰的RNA條帶,其中28S條帶的亮度約為18S條帶的2倍,5S條帶隱約可見.②用該法提取的新鮮組織RNA,經電泳鑒定及反轉錄-聚合酶鏈反應檢測,顯示RNA的純度及模板性較好.全部操作過程可在2.5 h內完成.結論用改進方法提取的新鮮組織RNA質量穩定,電泳鑒定快速可靠.

作 者： 王晉 王建民 茍元彬 王燕   作者單位： 王晉(武裝警察部隊青海省總隊醫院外二科,青海省,西寧市,810000)

王建民,茍元彬,王燕(解放軍第三軍醫大學大坪醫院野戰外科研究所六室,重慶市,400042) 

刊 名： 中國臨床康復  ISTIC PKU 英文刊名： CHINESE JOURNAL OF CLINICAL REHABILITATION  年，卷(期)： 2006 10(25)  分類號： Q81  關鍵詞： RNA   逆轉錄聚合酶鏈反應   電泳  

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