地衣芽孢桿菌胞外蛋白酶的純化及特性分析

研究不同條件對地衣芽孢桿菌De株產生胞外蛋白酶的量及其酶活性的影響,結果表明在pH為7.4-8.2范圍內,溫度為30℃時,培養8-12h的菌株所分泌胞外產物中的蛋白酶活性最高.實驗先以半透膜法收集芽孢桿菌的胞外產物,然后再經過硫酸銨沉淀過夜、Sephadex G-100凝膠層析和DEAE-Cellulose離子交換層析及聚丙烯酰胺凝膠電泳等四個步驟的分離純化后,可以得到含有3種主要蛋白質(BLP1、BLP2、BLP3)成分的胞外蛋白酶,其分子量分別為66.2KD、31.0KD及約20.1KD,所得純化蛋白酶的蛋白濃度為0.773μg/mL,蛋白回收率為11.66%.實驗還發現,純化的胞外蛋白酶在100℃下作用30min,仍可保持其活力,可見具有相當的熱穩定性,而其酶活最佳的pH和溫度條件分別為7.8和45- 65℃.酶活抑制實驗顯示EDTA、銅、鈷、鎂離子等均可成為其酶活抑制因子;而絲氨酸蛋白酶抑制劑甲基磺酰氟(PMSF)、鐵、錳、鋇、鈣離子等對酶活性沒有明顯影響;鋅則會令之酶活性其部分喪失.

作 者： 曹煜成 李卓佳 吳灶和 馮娟 CAO Yu-Cheng LI Zhuo-Jia WU Zao-He FENG Juan   作者單位： 曹煜成,CAO Yu-Cheng(中國水產科學研究院南海水產研究所,廣州,510300;湛江海洋大學水產學院,湛江,524000)

李卓佳,馮娟,LI Zhuo-Jia,FENG Juan(中國水產科學研究院南海水產研究所,廣州,510300)

吳灶和,WU Zao-He(湛江海洋大學水產學院,湛江,524000) 

刊 名： 水生生物學報  ISTIC PKU 英文刊名： ACTA HYDROBIOLOGICA SINICA  年，卷(期)： 2006 30(3)  分類號： Q936  關鍵詞： 地衣芽孢桿菌   胞外產物   純化   特性分析  

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