意大利蜜蜂蜂毒磷脂酶A2基因在桿狀病毒-昆蟲細胞系統中的表達

利用Bac to Bac系統將意大利蜜蜂蜂毒磷脂酶A2(AmPLA2)基因cDNA克隆至轉移載體pFastBacHTa中,得到pBacHT-AmPLA2,再將其轉化入含穿梭載體Bacmid的受體大腸桿菌DH10Bac中,通過轉座作用,得到含AmPLA2基因的重組病毒rBacmid-AmPLA2的DNA.提取其基因組DNA,用脂質體介導轉染粉紋夜蛾細胞Tn-5B1-4,得到重組病毒rACV-Bac-AmPLA2.用此重組病毒感染Tn-5B1-4細胞,在細胞中表達AmPLA2.SDS-PAGE電泳結果顯示,與6×His Tag融合表達的產物蛋白分子量約為18 kD左右,表達量約占細胞總蛋白的5.35%.Western blot印跡顯示,融合表達產物能與意大利蜜蜂蜂毒AmPLA2抗血清發生免疫反應.生物活性測定顯示,含表達產物的細胞蛋白粗提物對底物蛋黃的酶活力約為6.13 μmol·min-1·mg-1.

作 者： 沈立榮 邢麗蘋 張傳溪 程家安 SHEN Li-Rong XING Li-Ping ZHANG Chuan-Xi CHENG Jia-An   作者單位： 沈立榮,SHEN Li-Rong(浙江大學生物系統工程與食品科學學院)

邢麗蘋,張傳溪,程家安,XING Li-Ping,ZHANG Chuan-Xi,CHENG Jia-An(浙江大學應用昆蟲學研究所,杭州,310029) 

刊 名： 昆蟲學報  ISTIC PKU 英文刊名： ACTA ENTOMOLOGICA SINICA  年，卷(期)： 2006 49(3)  分類號： Q966  關鍵詞： 意大利蜜蜂   蜂毒   磷脂酶A2基因   桿狀病毒-昆蟲細胞系統   表達  

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