人趨化因子巨噬細胞炎性蛋白3α的克隆與原核表達

目的克隆人趨化因子MIP-3 alpha基因,表達并初步純化MIP-3 alpha融合蛋白.方法從人扁桃體中提取總RNA,再進行RT-PCR,擴增MIP-3 alpha成熟蛋白基因,并在5'和3'端分別添加NcoI和EcoRI酶切位點,通過與之對應的存在于pET32a(+)質粒上的酶切位點重組于pET32a(+)載體上,轉化E.coli BL21trxB(DE3),篩選陽性克隆,酶切鑒定,DNA測序檢測插入序列的正確性,缺失突變MIP-3 alpha序列前端多余堿基,獲得MIP-3 alpha天然蛋白表達載體pET32a(+)/MIP-3 alpha,SDS-PAGE分析其表達,Westem Blot驗證融合蛋白.大量表達并初步純化MIP-3 alpha融合蛋白.結果成功克隆了MIP-3 alpha基因,表達并初步純化得到MIP-3alpha融合蛋白.結論在大腸桿菌中成功構建的MIP-3 alpha硫氧還蛋白融合表達載體,以可溶性蛋白的方式表達MIP-3 alpha硫氧還蛋白.

作 者： 顧濤 羅福康 沈大斌 龔小云 鄭紅   作者單位： 第三軍醫大學西南醫院綜合實驗研究中心,重慶400038  刊 名： 重慶醫學  ISTIC PKU 英文刊名： CHONGQING MEDICINE  年，卷(期)： 2006 35(4)  分類號： Q785  關鍵詞： MIP-3 alpha   融合表達   pET32a(+)質粒   蛋白純化  

【人趨化因子巨噬細胞炎性蛋白3α的克隆與原核表達】相關文章：

人源胸腺素α原和白介素2融合蛋白的基因克隆與原核表達04-27

人IP-10蛋白原核表達及其活性鑒定04-26

IL15/PAP融合蛋白基因克隆及其原核與植物表達載體的構建04-26

GST-talin1融合蛋白的原核表達及純化04-27

新城疫病毒F和HN蛋白的原核表達04-27

酸弗林蛋白酶酸性氨基酸簇分選蛋白-1的原核表達、純化及多克隆抗體制備04-27

重組豬源戊型肝炎病毒衣殼蛋白的原核表達及鑒定04-26

人紅細胞血型糖蛋白GYPC的克隆與表達04-26

GST-hDSL重組蛋白的原核表達純化及對人造血祖細胞的擴增作用04-26

麻瘋樹毒蛋白curcin2基因的兩個原核表達載體的構建和表達04-26