大鼠對氧磷酶1真核表達載體的構建及在體外的表達

目的 構建大鼠對氧磷酶1(paraoxonase 1,PON1)真核表達載體,并檢測其在體外培養細胞中的表達及功能,為進一步探索運用其進行基因防治肺部感染奠定基礎.方法 利用RT-PCR擴增大鼠PON1編碼區全長序列,克隆入pcDNA 3.1(+),鑒定無誤后,脂質體轉染A549細胞及293細胞, Western印跡檢測蛋白表達,并檢測其芳香酯酶活性及對銅綠假單胞菌密度感知系統信號分子N-酰基高絲氨酸內酯(N-acylhomoserine lactones,AHLs)的水解功能.結果 分別從大鼠肝組織中擴增出1 153 bp片段,克隆入表達載體后進行酶切鑒定和測序結果正確.轉染細胞后能夠表達目的 蛋白,該蛋白具有芳香酯酶和AHLs內酯酶活性.結論 成功構建了含有大鼠PON1真核表達載體,質粒能夠在真核細胞中表達,能夠有效地水解銅綠假單胞菌密度感知系統信號分子.

作 者： 楊碩 熊盛道 熊維寧 許淑云 史雪梅 徐國鵬 蘭芬 陸小霞 胡瓊潔 YANG Shuo XIONG Shengdao XIONG Weining XU Shuyun SHI Xuemei XU Guopeng LAN Fen LU Xiaoxia HU Qiongjie   作者單位： 華中科技大學同濟醫學院附屬同濟醫院呼吸內科,衛生部呼吸病重點實驗室,武漢市,430030  刊 名： 醫學分子生物學雜志  ISTIC 英文刊名： JOURNAL OF MEDICAL MOLECULAR BIOLOGY  年，卷(期)： 2008 5(3)  分類號： Q784  關鍵詞： 銅綠假單胞菌   對氧磷酶   密度感知   基因的表達與調控  

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