丙型肝炎病毒NS5B全長基因及截短形式基因的克隆、表達及鑒定

目的 構建丙型肝炎病毒(HCV)NS5B-FL、NS5B-C21和NS5B-C51重組原核表達載體,并進行目的蛋白的表達及鑒定.方法 利用PCR技術擴增3種長度的NS5B基因,經BamHⅠ和XhoⅠ雙酶切后連接到經同樣酶切的原核表達載體pET-28a(+)上,轉化大腸桿菌BL21(DE3),IPTG誘導表達重組蛋白,并進行純化及鑒定.結果 所構建的3種重組質粒pET-28a(+)-NS5B-FL、pET-28a(+)-NS5B-C21和pET-28a(+)-NS5B-C51,轉化大腸桿菌BL21(DE3)后,經PCR及酶切鑒定,均能擴增或酶切出相應大小的目的基因片段,表達的6His-NS5B-FL融合蛋白主要以包涵體形式存在,而表達的6His-NS5B-C21和6His-NS5B-C51融合蛋白的可溶性明顯增加.純化的6His-NS5B-C21蛋白未發生降解,6His-NS5B-FL和6His-NS5B-C51蛋白發生了部分降解.純化后的3種蛋白均能與丙肝患者血清發生反應.結論 已成功構建了3種NS5B基因的重組表達載體,并獲得了目的蛋白表達,為進一步抗HCV藥物的篩選奠定基礎.

作 者： 楊華鳳 潘明潔 呂敏 李越希   作者單位： 楊華鳳,呂敏(南京醫科大學公共衛生學院流行病與衛生統計學系,南京,210029)

潘明潔,李越希(南京軍區軍事醫學研究所,南京,210002) 

刊 名： 中國生物制品學雜志  ISTIC 英文刊名： CHINESE JOURNAL OF BIOLOGICALS  年，卷(期)： 2008 21(1)  分類號： Q786  關鍵詞： 丙型肝炎病毒   非結構區5B蛋白   克隆   表達  

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