化學(xué)與酶促相結(jié)合合成并克隆核糖體失活蛋白Gelonin基因

利用已知Gelonin的氨基酸序列,逆向推算出整個(gè)基因的堿基序列,根據(jù)E.coli的密碼子偏愛(ài)性和后續(xù)基因克隆的需要,通過(guò)沉默突變?cè)O(shè)計(jì)相應(yīng)的酶切位點(diǎn)和堿基序列,將整個(gè)基因分為四段,每個(gè)片段約175～220 bp,每一個(gè)片段中的互補(bǔ)鏈從5′末端用化學(xué)合成100～120的堿基單鏈,其中兩個(gè)鏈的3′末端有20個(gè)互補(bǔ)堿基.利用T4DNA 聚合酶酶促添補(bǔ)成雙鏈DNA,用分子克隆技術(shù),分別構(gòu)建重組子,然后再構(gòu)建成含整個(gè)Gelonin基因的表達(dá)載體pET-gel進(jìn)行表達(dá),經(jīng)誘導(dǎo)后,獲得了一個(gè)28 000的重組蛋白,并主要以可溶形式存在.

作 者： 李卓玉 石亞偉 袁靜明 Wise J.G Trommer W.E   作者單位： 李卓玉,石亞偉,袁靜明(山西大學(xué)生物工程中心,太原,030006)

Wise J.G,Trommer W.E(Kaiserslautern 大學(xué)化學(xué)系,Kaiserslautern 67653,德國(guó)) 

刊 名： 高等學(xué)校化學(xué)學(xué)報(bào)  ISTIC SCI PKU 英文刊名： CHEMICAL JOURNAL OF CHINESE UNIVERSITIES  年，卷(期)： 2002 23(3)  分類(lèi)號(hào)： O516  關(guān)鍵詞： 核糖體失活蛋白   Gelonin   基因化學(xué)合成   重組子   表達(dá)  

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