用參數Z表征疏水色譜中脲變α-糜蛋白酶及其折疊中間體的分子構象變化

目的 用參數Z表征疏水色譜中脲變α-糜蛋白酶(α-Chy)及其折疊中間體的分子構象變化.方法 用疏水色譜法對不同脲變條件下的α-Chy進行分離,對收集的不同餾分用基質輔助激光解吸附離子化飛行時間質譜(HPHIC-MALDI-TOF-MS)進行檢測,并用紫外和熒光光譜對其分子構象變化進行了驗證.結果 確認了脲變α-Chy中僅有一個穩定的折疊中間體存在,發現二者的Z值均隨脲濃度的增加而減小.在脲濃度范圍為0～3.0 mol·L-1時,α-Chy折疊中間體的Z值遠小于天然α-Chy的Z值,而脲濃度為4.0 mol·L-1和5.0 mol·L-1時,折疊中間體的Z值稍大于天然α-Chy的Z值.結論 α-Chy折疊中間體的分子構象隨脲濃度改變基本呈連續性變化,而天然α-Chy的分子構象隨脲濃度呈不連續性變化.進一步發現α-Chy的Z值與其復性回收率之間存在著相似的變化規律.中間體的保留機理服從計量置換保留理論(SDT-R),且得到的參數Z可用來表征天然α-Chy和其折疊中間體的分子構象變化.

作 者： 耿信篤 劉振嶺 柯從玉 李建軍 GENG Xin-du LIU Zhen-ling KE Cong-yu LI Jian-jun   作者單位： 耿信篤,柯從玉,李建軍,GENG Xin-du,KE Cong-yu,LI Jian-jun(西北大學,現代分離科學研究所/合成與天然功能分子化學教育部重點實驗室,陜西,西安,710069)

劉振嶺,LIU Zhen-ling(西北大學,現代分離科學研究所/合成與天然功能分子化學教育部重點實驗室,陜西,西安,710069;新鄉醫學院,化學教研室,河南,新鄉,453003) 

刊 名： 西北大學學報(自然科學版)  ISTIC PKU 英文刊名： JOURNAL OF NORTHWEST UNIVERSITY(NATURAL SCIENCE EDITION)  年，卷(期)： 2007 37(6)  分類號： O658  關鍵詞： 蛋白折疊   分子構象   疏水相互作用色譜   基質輔助激光解吸附離子化飛行時間質譜(MALDI-TOF-MS)   計量置換   α-糜蛋白酶(α-Chy)   折疊中間體  

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