人朊蛋白不同N-糖基化修飾突變體的構建及其在哺乳動物細胞中表達

構建并表達人朊蛋白N-糖基化修飾位點突變的真核表達載體,有助于進一步研究朊蛋白N-糖基化修飾的生物學功能.定點突變野生型人朊蛋白基因PRNP,將獲得的突變體亞克隆至真核表達載體pcDNA3.1中,并在人宮頸癌細胞株HeLa中瞬時表達各種朊蛋白糖基化修飾位點突變體,利用免疫印跡和糖苷酶消化等糖蛋白分析方法鑒定表達產物的糖基化形式.經Western blot鑒定,野生型和突變型朊蛋白表達產物出現不同形式的泳動特征,分別出現特異性糖基化修飾的多個條帶,單糖基化修飾的兩條條帶和無糖基化修飾的一條條帶.經PNGase F糖苷酶消化,野生型和糖基化單點突變型表達產物均能被糖苷酶消化,其分子量下移,去糖基化突變型表達產物的分子條帶位置不變.通過突變野生型人朊蛋白基因PRNP的N-糖基化修飾位點,獲得單糖基化修飾和去N-糖基化修飾的6種人朊蛋白突變體,并能夠在HeLa細胞株中瞬時表達單糖基化修飾和去N-糖基化修飾朊蛋白,為進一步研究朊蛋白的相關功能建立良好基礎.

作 者： 楊洋 陳嵐 韓兵社 許彩民 潘華珍 YANG Yang CHEN Lan HAN Bing-She XU Cai-Min PAN Hua-Zhen   作者單位： 中國醫學科學院基礎醫學研究所,中國協和醫科大學基礎醫學院,醫學分子生物學國家重點實驗室,北京,100005  刊 名： 生物工程學報  ISTIC PKU 英文刊名： CHINESE JOURNAL OF BIOTECHNOLOGY  年，卷(期)： 2006 22(3)  分類號： Q513+.2 Q812  關鍵詞： 朊蛋白   N-糖基化修飾   糖蛋白  

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