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靶向大鼠β-catenin基因的shRNA真核表達(dá)質(zhì)粒的構(gòu)建與篩選
目的 構(gòu)建靶向β-連環(huán)蛋白(β-catenin)基因的shRNA的真核表達(dá)質(zhì)粒,并篩選出沉默β-catenin基因效果最明顯的shRNA表達(dá)質(zhì)粒.方法 設(shè)計3對針對β-catenin 基因不同位點的shRNA片段,構(gòu)建攜帶此shRNA片段的真核表達(dá)質(zhì)粒(shRNA1～3)并行測序分析,電穿孔轉(zhuǎn)染神經(jīng)干細(xì)胞(neural stem cells NSCs),測定轉(zhuǎn)染率,并分別采用RT-PCR及Western 印跡檢測β-catenin mRNA和蛋白表達(dá)情況,免疫組化方法檢測shRNA對神經(jīng)干細(xì)胞分化的影響.結(jié)果 構(gòu)建靶向β-catenin基因的shRNA真核表達(dá)重組質(zhì)粒shRNA1,2,3.經(jīng)篩選,NSCs轉(zhuǎn)染shRNA3后,β-catenin RNA水平和蛋白水平均明顯低于陰性對照組和空白對照組(0.08±0.00 vs 0.75±0.01,0.74±0.02;0.12±0.10,vs 0.56±0.02,0.65±0.01,P均＜0.01;與空白組和陰性對照組相比,shRNA3組NSCs分化為GFAP陽性細(xì)胞的百分率明顯增加,分化為NSE陽性細(xì)胞的百分率明顯減少(P＜0.05).結(jié)論 β-catenin RNA3對神經(jīng)干細(xì)胞的β-catenin表達(dá)具有明顯抑制作用,可影響細(xì)胞的分化.為研究wnt/β-catenin信號途徑在NSCs生長分化中的作用奠定基礎(chǔ).
作 者： 張曉英 楊于嘉 諶崇峰 姚躍 王慶紅 ZHANG Xiaoying YANH Yujia CHEN Chongfeng Yao Yue WANG Qinghong 作者單位： 張曉英,ZHANG Xiaoying(中南大學(xué)湘雅醫(yī)院兒科,長沙市,410008;新疆醫(yī)科大學(xué)第一附屬醫(yī)院兒科,烏魯木齊市,830054)楊于嘉,諶崇峰,姚躍,王慶紅,YANH Yujia,CHEN Chongfeng,Yao Yue,WANG Qinghong(中南大學(xué)湘雅醫(yī)院兒科,長沙市,410008)
刊 名： 醫(yī)學(xué)分子生物學(xué)雜志 ISTIC 英文刊名： JOURNAL OF MEDICAL MOLECULAR BIOLOGY 年，卷(期)： 2010 7(2) 分類號： Q782 關(guān)鍵詞： β-連環(huán)蛋白 短發(fā)夾狀RNA 電穿孔 神經(jīng)干細(xì)胞 β-catenin short hairpin RNA electroporation neural stem cells【靶向大鼠β-catenin基因的shRNA真核表達(dá)質(zhì)粒的構(gòu)建與篩選】相關(guān)文章：
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