人類GAD67基因擴增及pEGFP-C2-GAD67真核表達載體的構建

目的 擴增人類谷氨酸脫羧酶(GAD)67基因,并構建pEGFP-C2-GAD67真核表達載體.方法 應用基因重組技術,采用反轉錄PCR方法對來自人類腦組織cDNA中編碼GAD67的基因片段進行擴增,插入PUC57克隆載體,經Xho Ⅰ和BamH Ⅰ雙酶切出GAD67基因片段,再克隆入真核表達載體pEGFP-C2后構建pEGFP-C2-GAD67重組載體,經PCR擴增、酶切后測序鑒定. 結果 人類GAD67基因擴增產物大小為1 785 bp,編碼594個氨基酸殘基.重組真核表達載體經酶切鑒定表明為正確重組子,PCR正確擴增出目的條帶.與GenBank中人類GAD67基因序列比較,核苷酸和氨基酸水平的同源性分別達99.78%和99.66%. 結論 人類GAD67基因克隆后,可成功構建真核表達載體pEGFP-C2-GAD67,為進一步該基因轉染神經干細胞移植治療癲癇提供了實驗基礎.

作 者： 劉智良 馬宏偉 姚志彬 徐如祥 張世忠 王嬈 LIU Zhi-liang MA Hong-wei YAO Zhi-bin XU Ru-xiang ZHANG Shi-zhong WANG Rao   作者單位： 劉智良,姚志彬,LIU Zhi-liang,YAO Zhi-bin(510275,廣州,中山大學基礎醫學院博士后流動站)

馬宏偉,徐如祥,張世忠,王嬈,MA Hong-wei,XU Ru-xiang,ZHANG Shi-zhong,WANG Rao(510282,廣州,南方醫科大學珠江醫院神經外科) 

刊 名： 中華神經醫學雜志  ISTIC PKU 英文刊名： CHINESE JOURNAL OF NEUROMEDICINE  年，卷(期)： 2006 5(11)  分類號： Q3  關鍵詞： 谷氨酸脫羧酶(GAD)67   克隆   真核表達質粒  

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