海蓬子鹽脅迫初期抑制消減雜交cDNA文庫的構建

為提高縮葉肉質鹽生植物海蓬子總RNA和mRNA的質量,將改良CTAB法與Tripure 試劑盒方法相結合, 從 300 mg海蓬子發芽后20 d的幼苗中成功分離和純化了高純度的總RNA和mRNA.并以無NaCl處理為Driver,以 200 mmol/L NaCl處理 24 h、48 h、72 h的幼苗為Tester,通過cDNA雙鏈的合成及兩次PCR擴增,富集到兩組處理中差異表達的大小在200～1 300 的cDNA序列,pGEM-T的連接和藍白斑篩選表明雜交文庫滴度和重組率分別達到2.6×107和96%,共收集陽性克隆12 000個, 形成了抑制消減雜交的質粒cDNA文庫.隨機挑取酶切質粒的電泳分析表明,載體中均有插入片段.兩種RNA提取方法的結合有效提高了多汁多色素海蓬子RNA的質量,高效抑制消減雜交文庫的建立為進一步分析基因的差異表達及分離抗鹽基因奠定了基礎.

作 者： 張大棟 馬鴻翔 吉曉佳 周春霖 王茂文 湯日圣 楊永華 ZHANGDa-dong MA Hong-xiang JI Xiao-jia ZHOU Chun-lin WANG Mao-wen TANG Ri-sheng YANG Yong-hua   作者單位： 張大棟,ZHANGDa-dong(江蘇省農業科學院農業遺傳生理研究所暨江蘇省農業生物學重點實驗室,江蘇,南京,210014;南京大學醫藥生物技術國家重點實驗室,江蘇,南京,210093)

馬鴻翔,湯日圣,MA Hong-xiang,TANG Ri-sheng(江蘇省農業科學院農業遺傳生理研究所暨江蘇省農業生物學重點實驗室,江蘇,南京,210014)

吉曉佳,楊永華,JI Xiao-jia,YANG Yong-hua(南京大學醫藥生物技術國家重點實驗室,江蘇,南京,210093)

周春霖,王茂文,ZHOU Chun-lin,WANG Mao-wen(江蘇沿海地區農業科學研究所,江蘇,鹽城,224002) 

刊 名： 江蘇農業學報  ISTIC PKU 英文刊名： JIANGSU JOURNAL OF AGRICULTURAL SCIENCES  年，卷(期)： 2006 22(2)  分類號： Q785  關鍵詞： 鹽生植物海蓬子   抑制消減抑制雜交   cDNA文庫   RNA分離  

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