重組TRX-BNP融合蛋白的構建和表達

目的:構建人B型鈉尿肽(BNP)表達質粒,用pET原核表達系統制備重組抗原TRX-BNP融合蛋白.方法:根據GenBank中檢索到的人BNP成熟蛋白序列編碼,設計合成編碼BNP-32蛋白的DNA,并分別在5'端和3'端設計EcoR I和HindⅢ酶切位點,經聚合酶鏈反應(PCR)、構建重組質粒pET32a.BNP,并在BL21(DE3)經IPTG誘導表達,Ni-NTA親和層析制備TRX-BNP.通過DNA測序、融合蛋白的相對分子質量分析及Western印跡來鑒定TRX-BNP質粒及表達的BNP抗原的正確性.結果:DNA測序結果表明,所獲得的BNP基因編碼序列符合序列設計的要求,正確插入設計位點,重組質粒pET32a.BNP構建成功.IPTG誘導后SDS-PAGE電泳顯示有特異性蛋白TRX-BNP表達,蛋白相對分子質量21 400,Ni-NTA親和純化,在UVP凝膠成像分析系統上作定量分析,BNP蛋白純度達到95%.Western印跡結果證實TRX-BNP蛋白特異性表達.結論:成功制備TRX-BNP融合蛋白.

作 者： 游曉華 秦永文 黃盛東 袁揚 龔德軍   作者單位： 游曉華,秦永文(第二軍醫大學長海醫院心血管內科,上海,200433)

黃盛東,袁揚,龔德軍(長海醫院胸心外科) 

刊 名： 第二軍醫大學學報  ISTIC PKU 英文刊名： ACADEMIC JOURNAL OF SECOND MILITARY　MEDICAL UNIVERSITY  年，卷(期)： 2006 27(6)  分類號： Q781  關鍵詞： B型鈉尿肽   融合蛋白   硫氧還蛋白  

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