細(xì)菌內(nèi)同源重組法制備FMDV聚蛋白編碼基因重組腺病毒

采用PCR方法從重組質(zhì)粒pMD18-T/PP中擴增出FMDV的聚蛋白(PP)編碼基因,再亞克隆至腺病毒穿梭質(zhì)粒中,形成重組穿梭質(zhì)粒rpAd-CMV/PP;將獲得的重組穿梭質(zhì)粒與腺病毒骨架載體通過在大腸桿菌內(nèi)質(zhì)粒間同源重組獲得重組腺病毒質(zhì)粒rpAd/PP.將腺病毒載體線性化后用脂質(zhì)體介導(dǎo)轉(zhuǎn)染293細(xì)胞從而獲得含有口蹄疫病毒PP編碼基因的重組腺病毒.通過倒置顯微鏡觀測,可見明顯的細(xì)胞病變,利用熒光顯微鏡可觀測到報告基因綠色熒光蛋白的表達(dá),并在電鏡下觀察到FMDV的空衣殼.結(jié)果證明已成功獲得了含有口蹄疫病毒PP編碼基因的重組腺病毒rAd/PP,并成功表達(dá)組裝FMDV空衣殼,為FMDV腺病毒活載體疫苗的研究奠定了基礎(chǔ).

作 者： 張興旺 王勤 柳紀(jì)省 殷相平 李志勇 ZHANG Xing-wang WANG Qin LIU Ji-xing YIN Xiang-ping LI Zhi-yong   作者單位： 張興旺,ZHANG Xing-wang(中國農(nóng)業(yè)科學(xué)院蘭州獸醫(yī)研究所,家畜疫病病原生物學(xué)國家重點實驗室,農(nóng)業(yè)部畜禽病毒學(xué)重點開放實驗室,蘭州,730046;蘭州大學(xué)生命科學(xué)學(xué)院,蘭州,730000;甘肅省人民醫(yī)院檢驗中心,蘭州,730000)

王勤,WANG Qin(蘭州大學(xué)生命科學(xué)學(xué)院,蘭州,730000)

柳紀(jì)省,殷相平,李志勇,LIU Ji-xing,YIN Xiang-ping,LI Zhi-yong(中國農(nóng)業(yè)科學(xué)院蘭州獸醫(yī)研究所,家畜疫病病原生物學(xué)國家重點實驗室,農(nóng)業(yè)部畜禽病毒學(xué)重點開放實驗室,蘭州,730046) 

刊 名： 微生物學(xué)報  ISTIC PKU 英文刊名： ACTA MICROBIOLOGICA SINICA  年，卷(期)： 2006 46(2)  分類號： Q786 S852  關(guān)鍵詞： FMDV   聚蛋白   編碼基因   同源重組   重組腺病毒   空衣殼  

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