TRAIL蛋白原核表達載體的構建及表達研究

目的 利用蛋白自剪切功能原核表達系統構建腫瘤壞死因子相關凋亡誘導配體(TRAIL) 胞膜外段融合蛋白表達載體,并進行表達條件優化和初步純化.方法 設計基因拼接引物,合成TRAIL基因胞膜外段雙鏈cDNA序列,將其連接于克隆載體pMD18-T中;將酶切、純化的TRAIL基因與經相同處理的載體pTWIN1相連接,轉化感受態大腸桿菌JM109,篩選陽性重組子.將鑒定(酶切及序列分析)陽性的重組子質粒轉入大腸埃希菌ER2566表達菌中, 采用蛋白質SDS-PAGE 電泳方法 分析不同濃度誘導劑異丙基硫代-β-D-半乳糖苷(IPTG) 、不同誘導溫度、不同誘導時間下目的蛋白表達情況.結果 成功獲得了包含TRAIL基因胞膜外段的雙鏈cDNA序列,酶切及序列分析證實成功構建了TRAIL胞膜外段蛋白自剪切功能原核表達載體.采用0.3 mmol/L IPTG、15 ℃誘導過夜(14～16 h),目的蛋白獲得較高表達量,且大部分為可溶性蛋白.結論 采用大腸埃希氏菌ER2566,TRAIL胞膜外段融合蛋白獲得高表達,經簡單后續處理即可獲得不含任何額外氨基酸的可溶性目的蛋白.

作 者： 楊文理 陳守春 陳毅榮 覃揚 YANG Wen-li CHEN Shou-chun CHEN Yi-rong QIN Yang   作者單位： 楊文理,覃揚,YANG Wen-li,QIN Yang(四川大學華西基礎醫學與法醫學院,生物化學與分子生物學教研室,成都,610041)

陳守春,陳毅榮,CHEN Shou-chun,CHEN Yi-rong(地奧集團新藥研究所) 

刊 名： 四川大學學報（醫學版）  ISTIC PKU 英文刊名： JOURNAL OF SICHUAN UNIVERSITY(MEDICAL SCIENCE EDITION)  年，卷(期)： 2006 37(5)  分類號： Q5  關鍵詞： 腫瘤壞死因子相關誘導凋亡配體   蛋白內含子   原核表達  

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